种质资源库的液氮罐低温建设方法探讨

种质资源库的液氮罐低温建设方法探讨

     种质资源整体建设长期保存，是减少外部环境破坏利用人工条件极大保存种质资源的方法。，主要包括种子低温保存，超低温保存等最新前沿保存方法。利用液氮罐的种质资源保存是当今最先进的种质资源保存方法。也是最科学的保存方法。

     液氮罐是超低温保存方法之一，能够达到零下196度的温度，是长期永久保存种子的方法。这种方法是将种质材料(包括种子、组织体等)保存在-196℃的液氮环境中，让种子生命休眠并保存生命活力在极低的温度下，在液氮(-196℃)温度下，任何的细胞生长都能够长期的休眠停止，这也是认为目前为止唯一的作为植物种子长久休眠保存的最好办法。节省资源节省人力物力。

     这是一种整套技术，能够把物种温度变温到零下196度下并长久保存长久休眠，使其能够保存其生命活力，待使用时能够恢复其细胞生命力的技术方法。

一般来说，它包括以下6个步骤:

(1)前培养:对培养体短期的生长锻炼处理，使其提高耐液氮保存的能力。

(2)防冻:培养体放入防冻液中，使其细胞降低冰点，减少因形成冰晶可能造成的损伤。

(3)变温冷冻:按照不同变温模式降温冷冻，降温速度依不同种质材料采用特定的速度。

(4)超低温保存:将冷冻材料保存到有效低温环境中，以防止冰的游移或解体。

(5)解冻：一般认为快速解冻更好。从液氮环境中取出封装好的材料，与其容器一同放入+40℃的无菌水浴中，直到解冻后才回到室温下，未封装的材料放到20～30℃的液体培养基中解冻。

(6)生命力测定:如用TTC染色法等。

种质材料的超低温保存，传统的技术有干冻法、预冻法和两步法，上世纪80年代末和90个代初玻璃化法和包埋脱水法开始应用于植物材料的超低温保存。

干冻法:利用无菌空气流、干燥硅胶或饱和溶液表面的气相等对种质材料进行脱水处理，然后快速将其投入液氮贮存。

预冻法:将种质材料在添加保护剂(如蔗糖、二甲亚砜、甘油等)后置于低温冰箱或液氮蒸汽箱(-10～-70℃)中冰冻若干小时后投入液氮贮存。

两步法:种质材料在添加保护剂后，用程序降温仪以某个速率(每分钟0.1～0.5℃)降温至转移温度(-40～-70℃)，然后投入液氮中贮存，两步法较预冻法更为严格。

玻璃化法:种质材料用高浓度的复合冰冻保护剂处理后，快速投入液氮贮存，细胞直接用极高浓度的保护剂脱水，在快速降温时胞内胞外都进入玻璃化态，而不形成冰晶，从而避免了细胞结构的破坏。包埋脱水法:茎尖、分生组织和体细胞胚等种质材料用褐藻酸钙包埋后，第一阶段先在含高浓度蔗糖的培养基中脱水，第二步使用无菌空气为其脱水，放入液氮罐长期保存

液氮罐超低温保存技术的应用已经遍布整个植物行业，所有关于植物的研究领域都有涉及，植物的种子都在应用液氮罐超低温保存种子工艺，林木花木的种子资源的保存也有大规模的报道 液氮罐www.yedanguan1688.com